杂交瘤细胞的筛选方法和原理（细胞杂交与选择培养）
100次浏览 发布时间：2024-09-18 09:37:32
细胞杂交与选择培养
（1）融合：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞（如SP2/0—Agl4细胞株）。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中（通常使用RPMIl640商品配制），并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛或小牛血清培养的，每天更换新鲜培养液使成为对数分裂期生长旺盛的细胞。细胞用RPMIl640洗涤2—3次，把两种细胞合并在同—试管中，用50%的聚乙二醇（相对分子质量为1000—1500）作为融合剂，在37℃条件下融合l—2min。然后用1640培养液缓慢稀释，然后除去PEG，将细胞分散至HAT选择培养板中。电融合方法也可用于单克隆抗体制备，虽融合率较高，但一次融合的细胞数少，且需专门设备，故限制了其广泛使用。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例在5：1—10：1均可获得满意结果，每次融合细胞数量在10—10较为合适。融合后的细胞在40或96孔板上的HAT培养液(RPMIl640含10%—20%胎牛或小牛血清和HAT）中37℃，5%CO2条件下培养。融合后的细胞悬液中只有脾细胞和骨髓瘤细胞形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基中生长，其他形式的融合细胞均不能生长．未融合的细胞也不能在HAT培养液中生存。
在融合后的细胞培养过程中，饲养细胞（feeder cell）有助于杂交瘤细胞的生长。饲养细胞可用同种动物的腹腔细胞或胸腹细胞。腹腔细胞中的吞噬细胞能清除死亡细胞碎片。使背景更为清洁“干净”。同时饲养细胞分泌的细胞因子或活性物质有助于杂交瘤细胞的生长。现有商品“杂交瘤细胞生长因子”可用于替代饲养细胞。
（2）阳性杂交瘤细胞的筛选与单克降化：杂交细胞经约10—14d培养后，形成可用的细胞集落（克隆）。经过几次更换培养液（HT培养液）后进行抗体活性检测。常用的筛选枪测方法是ELISA和凝集试验，前者常用于可溶性抗原，后者适用于细胞、细菌等表面抗原。此外，Dot－ELISA、免疫印迹及免疫荧光试验均可用于杂交瘤细胞的筛选。
使许多细胞克隆混合生长的细胞分离为单个的细胞克隆的过程称克隆化（colonization）最常用的单克隆化方法是有限稀释法（limited dilution），即将混合细胞经稀释后分装于培养板上，使培养板的大部分孔中只出现一个细胞。为了确保抗体分泌细胞来源于单个细胞，克隆化过程可重复进行，称为亚克隆化（subclonization）。除有限稀释法外，荧光激活细胞分拣法（FACS）也用于杂交瘤细胞的克隆化过程。
相关文章
- 09-16 《后来烟火散南港》小说主角许南桥星临全文章节免费在线阅读
- 09-16 《渣男靠死老婆发财，我一胎十宝讨债》王秀芬陈泽宇许静然完结版免费阅读
- 09-16 他赠我逆鳞，护我杀他自己季怀玉墨无血魔尊全章节完结版在线阅读
- 09-16 【抖音热推】傅阮谢时修全文在线阅读-《暗黑竹马背刺我，改嫁绝嗣佛子后他红了眼》全章节目录
- 09-16 沈书瑶顾世钧小说<他沉寂多年，只因等她开口>全文在线阅读
- 09-16 【抖音】老婆把我丢进无人区出气，我杀疯了全文阅读
- 09-16 重生毒莲：公主的逆袭天命小说主角是楚瑶柳霜儿陆宸全文完整版阅读
- 09-16 开局一具尸，真相全靠剖(全章节)-冯渊孙文博孙巧儿在线阅读
- 09-16 宋清梨陆辰安全本章节阅读 （黑红岚柏）小说全集免费在线阅读
- 09-16 专业坑哥户：老弟把我送回前任手里第5章在线阅读
